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    3-4周齡雌性大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的原代培養(yǎng)

    發(fā)布時間: 2024-06-28  點擊次數(shù): 732次
      1. 3-4周齡雌性SD大鼠,皮下注射孕馬血清促xing腺激素(Pregnant Mare Serum Gonadotropin,PMSG) 60IU,48h后頸椎脫臼處死。
     
      2. 大鼠浸入75%乙醇浸泡5-10分鐘,轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中。
     
      3. 在距離大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪開皮膚、肌肉,可見白色的脂肪組織,拉出脂肪組織,可見到粉紅色的卵巢,摘除卵巢。
     
      4. 取卵巢放入預(yù)冷的含雙抗的緩沖液中,用緩沖液清洗卵巢三次,去除周圍組織及表面包膜。
     
      5. 在解剖顯微鏡下用1mL的注射器刺破卵泡,釋放顆粒細(xì)胞。
     
      6. 將懸液通過70μm篩網(wǎng)過濾至50ml離心管中,之后200g,離心7min。
     
      7. 計數(shù),種植到24孔板和大皿中。
     
      8. FSHR表達(dá)鑒定顆粒細(xì)胞。
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