通過茜素紅染色檢測細胞成骨分化:實驗原理
1、成骨誘導的過程是使鈣離子能夠以鈣鹽的方式沉淀下來,“鈣結節(jié)”,鑒定鈣結節(jié)的染色方法常用茜素紅染色法。
2、茜素紅:茜素磺酸鈉,茜素S,茜素紅S,茜素胭脂紅,1,2-二羥基蒽醌-3-磺酸鈉,1,2-二羥基蒽醌3-磺酸鈉鹽。橙黃色或黃棕色粉末。易溶于水,微溶于乙醇,不溶于苯。1%水溶液pH為2.15,其水溶液呈前黃褐色,加鹽酸后變?yōu)辄S色,加氫氧化鈉后則變成藍紫色。有刺激性。能與許多金屬離子生成有色化合物,能與鋯、釷、鋁、鈦及鈣發(fā)生顯色反應。
茜素紅染色實驗步驟:
1、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯I20分鐘,二甲苯Ⅱ20分鐘,無水乙醇I5分鐘,無水乙醇Ⅱ5分鐘,75%酒精5分鐘,自來水洗。
2、茜素紅染色:切片用茜素紅染液染5-10分鐘,自來水洗,將切片放置烤箱內烤干。
3、透明封片:切片入干凈的二甲苯透明5分鐘,中性樹膠封片。
4、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。
結果判讀:鈣鹽沉積出呈深紅色,背景淡紅色或者近無色。