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腦出血大小鼠模型構(gòu)建

腦出血大小鼠模型構(gòu)建

簡(jiǎn)要描述:
腦出血大小鼠模型構(gòu)建主要用于模擬人類腦出血的病理生理過(guò)程,以便深入研究腦出血的發(fā)病機(jī)制、治療策略及評(píng)估新藥的效果。這種模型在神經(jīng)科學(xué)研究領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

更新時(shí)間:2024-09-26

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廠商性質(zhì):其他

一、腦出血背景簡(jiǎn)介

腦出血(ICH)是指非外傷性腦實(shí)質(zhì)內(nèi)血管破裂引起的出血,占據(jù)全部腦猝中疾病的20%~30%,腦出血急性期死亡率高達(dá)30%~40%。腦出血發(fā)病年齡趨于年輕化,嚴(yán)重危害了人們的身心健康。腦出血發(fā)病的原因有很多,主要和腦血管的病變有關(guān),同時(shí)和高血脂、糖尿病、高血壓、血管的老化、吸煙等因素密切相關(guān),是腦血管類疾病中發(fā)病急、致死、致殘率高的一類腦血管疾病。


二、腦出血?jiǎng)游锬P秃?jiǎn)介

腦出血?jiǎng)游锬P椭饕糜谀M人類腦出血的病理生理過(guò)程,以便深入研究腦出血的發(fā)病機(jī)制、治療策略及評(píng)估新藥的效果。這種模型在神經(jīng)科學(xué)研究領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

三、腦出血大小鼠模型構(gòu)建方法

3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

小鼠

3.2實(shí)驗(yàn)材料

膠原酶,立體定位儀  shlq 注射器

3.3腦出血大小鼠模型構(gòu)建方法

目前開展科學(xué)研究的常用腦出血模型包括四種:膠原酶注射腦出血模型,自體血注入腦出血模型,微球囊充盈腦出血模型,高血壓性腦出血模型

3.31膠原酶注射腦出血模型

膠原酶分為多型,目前研究認(rèn)為IV型Ⅶ型用于腦出血建模最恰當(dāng)。
造模方法:SD 大鼠麻醉消毒后固定,顱骨轉(zhuǎn)孔,使用立體定位儀定位大鼠腦一側(cè)尾狀核,將微量注射器針頭插入腦組織尾狀核,分別分組注入0.5μL膠原酶,連續(xù)觀察10 min后即可見發(fā)生出血,且出血后癥狀明顯、持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。
優(yōu)點(diǎn):方法簡(jiǎn)單、快捷、成功率較高,出血穩(wěn)定性好,并可多次重復(fù);其能較好地模擬人體腦血管自發(fā)出血的生理生化過(guò)程以及出后血腫持續(xù)擴(kuò)大的病理變化過(guò)程。
缺點(diǎn):膠原酶并不能造成血管的物理性破裂,實(shí)際上是造成了小血管的廣泛慢性滲血,形成的血液滲出灶并不是真正意義上的局限的血腫,急性占位效應(yīng)不明顯,與人類腦出血的病理過(guò)程仍有區(qū)別。另外,膠原酶本身可造成腦組織嚴(yán)重的炎癥反應(yīng),并且對(duì)血管有廣泛的破壞作用,這些不良作用可對(duì)腦出血后單純由血腫形成的炎癥反應(yīng)研究產(chǎn)生干擾。另外,膠原酶對(duì)腦組織有細(xì)胞毒性作用,可嚴(yán)重?fù)p傷神經(jīng)功能及血腦屏障,因此并不能wq模擬人類單純腦出血后二次損傷的病理生理狀態(tài),不能用來(lái)研究腦出血后血腫周圍組織血液循環(huán)障礙,有一定的局限性。
應(yīng)用:適用于評(píng)估腦出血后各類指標(biāo)的長(zhǎng)期觀察。

3.32自體血局部注入法

①單步注射法該方法是抽取動(dòng)物自身一定量血液通過(guò)定位技術(shù)注入該動(dòng)物腦尾狀核造成該部位血腫的一種建模方法,自體血尾狀核注射腦出血模型是目前較為理想的腦出血模型。
造模方法:麻醉并固定動(dòng)物后,動(dòng)物顱骨局部轉(zhuǎn)孔,取選定腦組織局部注射動(dòng)物非肝素化自體血,注血量與動(dòng)物腦組織大小相關(guān)(腦鼠注血量分別為25 μl、50 μl和100 μl,分別相當(dāng)于人腦20 ml、40 ml和80 ml的出血量)。
但是自體血注入法存在注血過(guò)程中血液逆流現(xiàn)象,影響了血腫大小形成的穩(wěn)定性。由于尾狀核較為致密,注血時(shí)局部壓力較高,而新鮮凝固的xk強(qiáng)度很低,很難抵抗血腫膨脹的壓力,無(wú)法從根本上解決血液逆流的難題。
優(yōu)點(diǎn):由于造模方法操作簡(jiǎn)單,特別是應(yīng)用立體定向儀后,動(dòng)物的死亡率明顯降低,且血腫位置更加精確,除有不可避免的穿刺針道損傷外無(wú)其他異體物質(zhì)和雜質(zhì),故該模型的病理過(guò)程更接近人的自發(fā)性腦出血。
缺點(diǎn):模型都不能呈現(xiàn)良好的可重復(fù)性,且造成的血腫體積不穩(wěn)定,成功率較低,同時(shí)有出現(xiàn)腦室及硬膜下間隙之間破裂出血和注射的血液返流等情況。

②兩步注射法由于單步注射法存在較多的缺陷,現(xiàn)在常用的方法是兩步注射法,提高了成功率的同時(shí)減少了血液的返流。
造模方法:先注射15 μL自體血,后靜置針頭7 min,使血凝塊形成將針道封堵,再注射余下35 μL。
優(yōu)點(diǎn):除了一步注射法的優(yōu)點(diǎn)外,還能有效地減少針道反流的血量,較好地控制了血腫的大小、形態(tài)及部位。并且可以觀察血液凝固過(guò)程中局部腦組織的病理生理變化,此方法與人腦出血后演進(jìn)過(guò)程基本相似,可用于研究腦水腫機(jī)制及臨床藥物作用機(jī)制
缺點(diǎn):注入腦內(nèi)的血腫并非血管破裂造成的。血液注射過(guò)程中不可避免地有反溢現(xiàn)象和血液凝固堵塞針道的問(wèn)題,血腫形態(tài)和大小重復(fù)性差。
注意:自體血常取材于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的內(nèi)眥、股動(dòng)脈、心臟等處。內(nèi)眥取血血液標(biāo)本不易被污染,但取血為靜脈血,與腦動(dòng)脈出血的血液成分不符。動(dòng)脈穿刺法血液成分與腦出血成分較一致。但股動(dòng)脈穿刺法操作較復(fù)雜,成功率低。心臟穿刺法同樣可以得到純凈的動(dòng)脈血,操作較簡(jiǎn)便,損傷較小,但對(duì)操作人員技術(shù)要求較高,需熟練的操作技巧,反復(fù)穿刺動(dòng)物又容易導(dǎo)致動(dòng)物失血、感染死亡。

3.33自發(fā)性腦出血法此模型是研究成人型腦出血較理想的模型。
目前有實(shí)驗(yàn)采用基因培育方法培育出具有易出血的高血壓基因動(dòng)物,該動(dòng)物自出生起數(shù)周開始血壓自發(fā)升高,短時(shí)間內(nèi)可發(fā)生自發(fā)性腦出血。這類動(dòng)物也常用大鼠,是在已有高血壓基因大鼠的基礎(chǔ)上近親繁殖培育,其相對(duì)于祖代血壓更高,自發(fā)性腦出血發(fā)生率達(dá)80% ,發(fā)生出血的部位主要在大腦前內(nèi)側(cè)皮質(zhì)、枕皮質(zhì)和基底節(jié)。
優(yōu)點(diǎn):此模型將高血壓與腦卒中結(jié)合,相似度jg地模擬人腦卒中病理。
缺點(diǎn):這類動(dòng)物只代表腦出血的一小部分原因—高血壓,且動(dòng)物培養(yǎng)成本高昂,繁育時(shí)間較長(zhǎng),動(dòng)物體弱飼養(yǎng)困難,繁育的后代模型容易出現(xiàn)斷種、變種、基因突變的情況,應(yīng)用受到一定限制。

3.34微球囊充脹法造模方法:先將大鼠顱骨特定部位轉(zhuǎn)孔,然后將固定在針頭部位的微球囊通過(guò)該孔插入大腦尾狀核頭部,在20s內(nèi)注入微球囊50mL液體,保留10min,觀察微球囊對(duì)腦組織的壓迫作用,然后回抽微球囊內(nèi)液體,通過(guò)不斷變化微球囊體積模擬不同大小血腫對(duì)腦組織的壓迫作用。
缺點(diǎn):微球囊并非血液成分,研究者并沒(méi)有考慮腦出血后血腫的血液成分對(duì)腦組織的細(xì)胞毒性作用,血腫的腦細(xì)胞毒性作用的研究是人類需要解決的重要問(wèn)題,因此近年來(lái)的腦出血研究基本上已摒棄了此方法??偨Y(jié)無(wú)論哪種方法建立動(dòng)物腦出血模型均存在各自的優(yōu)缺點(diǎn)。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及各種新技術(shù)的不斷發(fā)展,許多新的腦出血建模方法不斷出現(xiàn),但仍有缺陷,需要不斷的研究和改進(jìn)。建立標(biāo)準(zhǔn)化腦出血?jiǎng)游锬P鸵殉蔀檠芯空吖餐非蟮哪繕?biāo),建模過(guò)程的各處理因素和影響因素統(tǒng)一化,減少對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,盡可能與人類腦出血的發(fā)病過(guò)程、病理生理過(guò)程趨向一致將是一個(gè)長(zhǎng)期探索的過(guò)程。


四、模型驗(yàn)證

4.1病理HE染色:顯微鏡下觀察腦組織的結(jié)構(gòu)和病理變化。

4.2生化檢測(cè):檢測(cè)血液中的炎癥因子、凝血功能指標(biāo)等,以了解腦出血后機(jī)體的生化反應(yīng)

五、小結(jié)

無(wú)論哪種方法建立動(dòng)物腦出血模型均存在各自的優(yōu)缺點(diǎn)。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及各種新技術(shù)的不斷發(fā)展,許多新的腦出血建模方法不斷出現(xiàn),但仍有缺陷,需要不斷的研究和改進(jìn)。建立標(biāo)準(zhǔn)化腦出血?jiǎng)游锬P鸵殉蔀檠芯空吖餐非蟮哪繕?biāo),建模過(guò)程的各處理因素和影響因素統(tǒng)一化,減少對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,盡可能與人類腦出血的發(fā)病過(guò)程、病理生理過(guò)程趨向一致將是一個(gè)長(zhǎng)期探索的過(guò)程


六、參考文獻(xiàn)

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